Дизайн праймеров и оптимизация протоколов пцр-пдрф исследований для идентификации устойчивых к лейкозу аллельных вариантов гена bola-drb3

Abstract

Лейкоз крупного рогатого скота - широко распространенное во всем мире вирусное заболевание. Болезнь встречается как у молочных, так и у мясных пород крупного рогатого скота, однако распространенность заболевания лейкозом выше у высокопродуктивных животных молочного направления. Разработка современных эффективных решений по борьбе с патогеном связана во многом с изучением механизмов устойчивости к лейкозу и в настоящее время работы в этом направлении являются актуальными. Механизмы устойчивости к инфекции связаны с главным комплексом гистосовместимости и цитокиновой сетью, ассоциированными с различными генами. Исследователями установлена взаимосвязь между генотипом BoLA-DRB3 и устойчивостью к лейкозу. Известно, что аллель BoLA класса II DRB3*0902 играет важную иммунологическую роль в подавлении репликации вируса, что приводит к устойчивости к прогрессированию заболевания и снижению вирусной нагрузки. Данные исследования имеют большое значение в разработке эффективных программ борьбы с вирусом лейкоза крупного рогатого скота. В результате проведенной нами работы были подобраны праймеры, позволяющие амплифицировать высокополиморфный целевой участок гена BoLA-DRB3 длиной в 284 п.н. Оптимизирован и отработан оптимальный протокол постановки ПЦР-ПДРФ (полимеразная цепная реакция - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов). На электрофореграммах результатов типирования особей крупного рогатого скота по гену BoLA-DRB3 после обработки ПЦР-продукта эндонуклеазой рестрикции Rsa I, BstY I и Hae III были получены продукты рестрикции, соответствующие конкретным аллельным вариантам гена.