ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ ГЕНА iNOS

Abstract

В настоящее время применяют два пути повышения эффективности традиционных противолейкозных мероприятий - разработка методов эффективной ранней диагностики и использование в селекционной практике признака устойчивости к персистентному лимфоцитозу. В этой связи наиболее актуальным направлением является определение механизмов генетической устойчивости к инфекционным заболеваниям в популяции сельскохозяйственных животных. В работе изложены данные результатов сравнительной оценки трех реакционных смесей от разных производителей с оптимизацией условий проведения ПЦР-амплификации по гену iNOS. В результате сравнительной оценки трех реакционных смесей «Encyclo Plus PCR kit» (ЗАО «Евроген»), ООО «СибЭнзайм», ГК «Алкор Био» для постановки ПЦР каждый из них позволяет наработать специфический ПЦР-продукт из выделенного ДНК крупного рогатого скота. Однако полученный ПЦР-продукт имеет разное качество, и стоимость, затраченная на постановку одной пробы также различна. Самое оптимальное количество амплифицируемой нуклеиновой кислоты при 540С наблюдается с набором от производителя «Encyclo Plus PCR kit» (ЗАО «Евроген»). На электрофореграмме виден высокий выход специфичного ПЦР-продукта гена iNOS длиной 186 п.н., без образования шмеров и неспецифики. Соответственно для дальнейшего проведения ПЦР-ПДРФ анализа и определения генотипов самым оптимальным является 1-ая реакционная смесь «Encyclo Plus PCR kit» (ЗАО «Евроген»).